| 膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染 |
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| 引用本文： | 黄常新,余海,杨关根,王青青,沈芬平,李达. 膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染[J]. 浙江医学, 2004, 26(10): 735-738 |
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| 作者姓名： | 黄常新 余海 杨关根 王青青 沈芬平 李达 |
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| 作者单位： | 1. 310009,杭州市第三人民医院
2. 浙江大学医学院 |
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| 摘 要： | 目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP 70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞.方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP 70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞.用G418抗性筛选获得阳性克隆.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、Westem Blotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP 70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面.结论成功地构建了膜表达HSP 70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70.转染细胞可以进一步制备新型瘤苗.
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| 关 键 词： | 膜表达 热休克蛋白70 载体构建 黑色素瘤细胞 |
| 修稿时间： | 2004-06-07 |
The construction of vector expressing membrane-bound heat shock protein 70 in eukaryotes and transfection into melanoma cells |
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| HUANG Changxin,YU Hai,YANG Guangen,et al.. The construction of vector expressing membrane-bound heat shock protein 70 in eukaryotes and transfection into melanoma cells[J]. Zhejiang Medical Journal, 2004, 26(10): 735-738 |
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| Authors: | HUANG Changxin YU Hai YANG Guangen et al. |
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| Affiliation: | HUANG Changxin,YU Hai,YANG Guangen,et al. The Third Hangzhou Municipal People's Hospital,Hangzhou 310009,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Membrane-bound expression Heat shock protein 70 Vector construction Melanoma cells |
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