膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制的研究

目的使用膝关节骨性关节炎（OA)临床组织标本与人软骨细胞株(NHAC).以分子生物学手法探讨WISP4在骨关节 软骨基质合成和分泌中的调控机理,明确其在骨性关节炎中的作用。方法NHAC细胞以1. 4 x 106/mL密度播种于6孔板 (直径3.5 cm)后培养48 h,于含有0.2%牛血清白蛋白（BSA)的DF中继续培养12 h,使细胞处于静止状态。向含0.02% BSA 的 DF 培养基中加人 10、50 和 100 ng/mL 的 Wnt 刺激细胞 6 h。对照 siRNA 与 P~catenin siRNA,使用 EntranserTM~R (Engreen)转染试剂转染至NHAC。转染24 h后使用PBS清洗细胞两次。向含0.02% BSA的DF培养基中加人50 ngjnL的 Wnt刺激细胞。向NHAC负荷不同剂量WISP4,24 h后观察MMPs和ADAMTS4。利用总RNA提取试剂盒提取组织标本和细 胞RNA,反转录产物cDNA作为PCR扩增模板进行定量PCR;使用蛋白提取试剂盒提取蛋白。结果在膝关节组织标本中发 现,在骨性关节炎关节软骨中WISP~1、Wnt和b

Study of WISP-1 signal regulation mechanism in knee joint osteoarthritis