| 表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化 |
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| 引用本文： | 张煜彬,吴忠秀,何彬,杨畅,李勇军,刘亭.表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化[J].细胞与分子免疫学杂志,2021(1). |
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| 作者姓名： | 张煜彬 吴忠秀 何彬 杨畅 李勇军 刘亭 |
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| 作者单位： | 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室;贵州医科大学药学院;贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81603189);贵州省科技计划项目(黔科合基础[2019]1280号);贵州省科学技术厅人才团队项目(黔科合平台人才[2016]5613\5677);中央引导地方科技专项项目(黔科中引地[2018]4006)。 |
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| 摘 要： | 目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。
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| 关 键 词： | 表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ) PD0721 间接ELISA 单链抗体 |
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