重组apo（a）KringleⅥ—10的纯化及生物活性

目的：通过研究重组apo(a)KringleⅣ-10（KⅣ-10）的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响。探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用，为La(a)致动脉粥样硬化机制研究提供依据。方法：将含apo(a)野生型KⅣ-10（wt-KⅣ-10/Trp^72)和突变型KⅣ-10(mut-KⅣ-10/Arg^72)基因片段的重组质粒，分别转化至E.coliDH5α菌株中并表达含这2个重组片段的融合蛋白，通过Glutathione-garose beads亲和层析进行分离和提纯，经L-Lys-Sepharose4B亲和层析检测其赖氨权结合能力。再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基，观察这2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞结合的影响。结果：实验结果显示；在E.coliDH5α菌株中表达的GST-wt-KⅣ-10/Trp^72能有效抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合；而GST-mut-KⅣ-10/Arg^72在任一浓度范围内均无这种抑制作用。结论：apo(a)KⅣ-10对纤溶的抑制作用与其赖氨酸结合能力密切相关；而KⅣ-10的赖氨酸的结合能力与其赖氨酸结合位点中的Trp^72有关。