抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达

目的 构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位（SLT2A）单链抗体基因（scFv），并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 通过连接肽（Gly4Ser），将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体（mAb）5F3的VL和Va连接成scFv基因VH-Linker-VL并在Va基因5′端和VL基因3′端引入Sfi Ⅰ和Not Ⅰ的酶切位点，克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中，转化Ecoli HB2151，IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后，SDS-PAGE和Westem blot分析鉴定。结果 经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实，基因构建正确。SDS-PAGE和Westem blot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达，表达产物的相对分子质量为27000，与理论预期值相符，且可与相应抗原特异结合。结论 成功地实现了抗SLT2A scFv基因的原核分泌表达，为探讨0157菌感染的机制及防治研究奠定了基础。

Construction and expression of anti-SLT 2A scFv gene in E. coli