| RNAi选择性下调大鼠心肌细胞上Gsα蛋白的体外实验 |
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| 引用本文： | 田运娇,易岂建,米青,刘官信,李娅莎.RNAi选择性下调大鼠心肌细胞上Gsα蛋白的体外实验[J].临床心血管病杂志,2010,26(7). |
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| 作者姓名： | 田运娇 易岂建 米青 刘官信 李娅莎 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学附属儿童医院心脏中心,重庆,400014
2. 重庆医科大学附属儿童医院儿研所,重庆,400014 |
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| 基金项目： | 重庆市自然基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:用RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)选择性下调大鼠心肌细胞上乌苷酸结合蛋白(Gs)α亚基(Gs protein alphala subunit, Gsα)的表达,筛选出抑制Gsα蛋白效果最明显的特异短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)表达质粒.方法:构建3条靶向gnas基因的特异与RNA质粒载体(shRNA1-3),以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体为阴性对照(HK),用脂质体LipofectamineTM LTX & PLUS转染原代培养的大鼠心肌细胞,并设空白对照组,转染后通过半定量RT-PCR和Western blot法检测Gsα mRNA和蛋白的表达情况,以内参照三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)进行标化.结果:shRNA1-3均使Gsα的mRNA和蛋白质表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),且shRNA3的抑制效果最显著,阴性对照质粒组与空白对照组Gsα表达差异无统计学意义.结论:利用RNAi技术成功下调了原代培养的心肌细胞中Gsα的表达,并筛选出沉默效果最明显的shRNA真核表达质粒,为心肌细胞的转染提供了可行的方法.
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| 关 键 词： | 心肌细胞 Gsα蛋白 RNA干扰 |
Selective knockdown of Gs protein alphala subunit in primary cultured rat myocytes by RNA interference in vitro |
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| TIAN Yunjiao,YI Qijian,MI Qing,LIU Guanxin,LI Yasha.Selective knockdown of Gs protein alphala subunit in primary cultured rat myocytes by RNA interference in vitro[J].Journal of Clinical Cardiology,2010,26(7). |
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| Authors: | TIAN Yunjiao YI Qijian MI Qing LIU Guanxin LI Yasha |
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| Keywords: | LipofectamineTM LTX&PLUS |
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