SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3mRNA表达水平 |
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引用本文: | 杨明,孙颖浩,许传亮,王林辉,顾正勤,陈文政.SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3mRNA表达水平[J].上海医学,2006,29(3):176-179. |
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作者姓名: | 杨明 孙颖浩 许传亮 王林辉 顾正勤 陈文政 |
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作者单位: | 200433,上海,第二军医大学附属长海医院泌尿外科;200433,上海,第二军医大学附属长海医院泌尿外科;200433,上海,第二军医大学附属长海医院泌尿外科;200433,上海,第二军医大学附属长海医院泌尿外科;200433,上海,第二军医大学附属长海医院泌尿外科;200433,上海,第二军医大学附属长海医院泌尿外科 |
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基金项目: | 国家杰出青年科学基金资助项目(30225046) |
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摘 要: | 目的采用SYBR Green I实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,建立检测前列腺癌抗原3(DD3)mRNA的标准,定量检测人体不同组织中该基因的表达水平。方法从LNCaP细胞中采用RT- PCR法扩增特异性DD3基因片段,将其与pMD18-T载体连接,转化宿主菌JM109,对质粒标准进行聚合酶链反应(PCR)检测及测序。纯化后检测质粒拷贝浓度,制备梯度浓度标准品。应用LightCycler荧光定量PCR仪对标准品进行检测。取正常人乳腺组织、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢、正常前列腺组织、前列腺增生及前列腺癌组织,定量检测DD3 mRNA表达。结果建立稳定的检测DD3 mRNA的标准,正常人乳腺、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢中无DD3 mRNA表达,在正常前列腺及前列腺增生组织中低表达,两者间差异无显著性 (P>0.05);在前列腺癌中高表达(P<0.05)。结论应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR技术检测 DD3 mRNA表达水平简便、可行、经济。DD3基因的表达具有良好的前列腺癌特异性。
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关 键 词: | 前列腺癌抗原3 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 SYBR Green Ⅰ 前列腺癌 |
收稿时间: | 2005-06-29 |
修稿时间: | 2005-06-29 |
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