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| 脊髓性肌萎缩症单细胞巢式聚合酶链反应技术的建立及初步应用 | |
| 引用本文： | 苏峻峰,陈万金,吴志英,王柠,林宇,林珉婷,幕容慎行. 脊髓性肌萎缩症单细胞巢式聚合酶链反应技术的建立及初步应用[J]. 中国现代神经疾病杂志, 2008, 8(2): 129-133 |
| 作者姓名： | 苏峻峰 陈万金 吴志英 王柠 林宇 林珉婷 幕容慎行 |
| 作者单位： | 1. 福建医科大学附属第一医院神经内科,福州,350005 2. 复旦大学附属华山医院神经内科,200040 3. 福建省神经病学研究所 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 福建省自然科学基金 , 福建省卫生厅青年科研项目 , 福建省高等学校科技创新团队研究计划 , 福建医科大学科学研究项目 |
| 摘 要： | 目的 建立单细胞巢式聚合酶链反应技术,并探讨进行脊髓性肌萎缩症基因诊断的可行性,为植入前遗传学诊断奠定基础.方法 应用显微操作技术从外周血中分离单个淋巴细胞,制备单细胞DNA模板.分别应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法扩增正常对照者外周血中单个淋巴细胞运动神经元生存(SMN)基因第7、8号外显子,计算其阳性率,建立SMN1基因的单细胞巢式聚合酶链反应技术.并应用该项技术及限制性酶切对1例脊髓性肌萎缩症患者进行基因诊断.结果 正常对照者巢式聚合酶链反应共扩增60个外周血单个淋巴细胞SMN1基因第7号外显子,其中54个扩增成功,阳性率为90%;引物延伸预扩增共扩增10个外周血单个淋巴细胞,巢式聚合酶链反应分别扩增SMN1基因第7、8号外显子,在20个聚合酶链反应扩增中共有17个单个淋巴细胞扩增成功,阳性率为85%.应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法对1例脊髓性肌萎缩症患者单个淋巴细胞扩增后经限制性酶切显示SMN1基因缺失,结果与全血基因组聚合酶链反应-限制性酶切一致.结论 巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增方法各有优缺点,巢式聚合酶链反应耗时短、操作简便,可作为脊髓性肌萎缩症患者单细胞基因诊断的首选方法. |
| 关 键 词： | 肌萎缩,脊髓性 聚合酶链反应 DNA引物 基因扩增 脊髓性肌萎缩症 单细胞巢式 聚合酶链反应技术 应用 spinal muscular atrophy technique polymerase chain reaction nested single cell application 显微操作技术 引物延伸预扩增方法 基因组 全血 基因缺失 显示 细胞扩增 单个淋巴细胞 结果 患者 |
Establishment and preliminary application of single cell nested polymerase chain reaction technique in spinal muscular atrophy |
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| SU Jun-feng,CHEN Wan-jin,WU Zhi-ying,WANG Ning,LIN Yu,LIN Min-ting,MURONG Shen-xing. Establishment and preliminary application of single cell nested polymerase chain reaction technique in spinal muscular atrophy[J]. Chinese Journal of Contemporary Neurology and Neurosurgery, 2008, 8(2): 129-133 | |
| Authors: | SU Jun-feng CHEN Wan-jin WU Zhi-ying WANG Ning LIN Yu LIN Min-ting MURONG Shen-xing |
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