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| 巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建 | |
| 引用本文： | 俞莉敏,党耕町,杨吉成,郑祖根. 巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2007, 11(14): 2702-2704 |
| 作者姓名： | 俞莉敏 党耕町 杨吉成 郑祖根 |
| 作者单位： | 1. 北京大学深圳医院骨科 2. 北京大学第三医院骨科,北京市,100083 3. 苏州大学基础医学院基因工程教研室,江苏省苏州市,215007 4. 苏州大学附属第二医院骨科,江苏省苏州市,215004 |
| 摘 要： | 目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1188bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统。结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1188bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符。将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统。结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础。 |
| 关 键 词： | 人骨形态发生蛋白 基因克隆 巢式RT-PCR |
| 文章编号： | 1673-8225（2007）14-02702-03 |
| 收稿时间： | 2006-09-08 |
| 修稿时间： | 2006-12-02 |
Amplification of full-length cDNA gene of human bone morphogenetic protein-2 and construction of its eukaryotic expression vector with nested reverse transcription-polymerase chain reaction |
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| Yu LM,Dang GT,Yang JC,Zheng ZG. Amplification of full-length cDNA gene of human bone morphogenetic protein-2 and construction of its eukaryotic expression vector with nested reverse transcription-polymerase chain reaction[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2007, 11(14): 2702-2704 | |
| Authors: | Yu LM Dang GT Yang JC Zheng ZG |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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