| 利用CRISPR/Cas9系统构建HepG2细胞THRAP3基因敲除细胞系 |
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| 引用本文： | 王丹丹,胡勇,方毅,韩秀晶,刘曜宁,靳彦文,曹诚.利用CRISPR/Cas9系统构建HepG2细胞THRAP3基因敲除细胞系[J].军事医学,2021,45(7):493-499. |
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| 作者姓名： | 王丹丹 胡勇 方毅 韩秀晶 刘曜宁 靳彦文 曹诚 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学解放军307临床学院,合肥 230032;解放军总医院第五医学中心内分泌科,北京 100071;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100850;安徽医科大学解放军307临床学院,合肥 230032;解放军总医院第五医学中心内分泌科,北京 100071;广州医科大学附属第一医院检验科,广州 510120 |
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| 摘 要： | 目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类肝癌细胞HepG2中的甲状腺激素受体相关蛋白3(THRAP3)基因,构建THRAP3基因敲除细胞系.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性靶向THRAP3基因第3个外显子相关序列的多条小向导RNA,通过T7核酸内切酶筛选出切割效率最高的载体,构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒.测序鉴定后,将重组质粒转染至HepG2细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选细胞株,挑取单克隆,再用PCR、测序等方法鉴定细胞基因型,免疫印迹方法鉴定细胞THRAP3敲除效果.使用高通量测序的方法进行基因表达分析.用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响,CCK-8试剂盒检测细胞增殖.结果 成功构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒,筛选出特异性敲除THRAP3基因的细胞系,验证了THRAP3敲除对细胞周期以及细胞增殖的影响.结论 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建并获得了THRAP3基因敲除细胞系并初步探究了THRAP3基因功能.
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 甲状腺激素受体相关蛋白3 HepG2细胞 基因编辑 |
THRAP3 gene knockout in HepG2 cell line using CRISPR/Cas9 system |
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| Authors: | WANG Dan-dan HU Yong FANG Yi HAN Xiu-jing LIU Yao-ning JIN Yan-wen CAO Cheng |
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