破伤风毒素单克隆抗体的制备及鉴定 |
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引用本文: | 陈洋洋,刘栋琦,张惟材,熊向华,张秀娟.破伤风毒素单克隆抗体的制备及鉴定[J].军事医学,2021,45(8):603-607. |
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作者姓名: | 陈洋洋 刘栋琦 张惟材 熊向华 张秀娟 |
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作者单位: | 哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨150076;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京100071;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京100071;哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨150076 |
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摘 要: | 目的 一株抗破伤风毒素鼠源单克隆抗体的制备与鉴定.方法 从实验室前期以破伤风类毒素为抗原筛选得到的6株稳定细胞株中选取4E12进行制备及鉴定,首先将4E12细胞株扩大培养后腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,经Protein G柱和PD10脱盐柱两步纯化鼠源单抗;其次通过SDS-PAGE电泳检测抗体纯度并通过分型试剂盒鉴定抗体轻重链亚型,免疫印迹法鉴定抗体结合区域及表位类型,非竞争ELISA法测定抗体亲和力常数以及小鼠中和实验评价抗体中和活性.结果 获得能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株4E12,其细胞培养上清效价为4×103,抗体轻重链分别为κ型和IgG1型,CDR3序列分别为SQSTHVPPT和ARKGTGTGFNY;4E12腹水抗体效价为3.2×104,抗体经纯化后纯度>95%,以线性表位与TeNT/Hc结构域特异性结合,两者的亲和力常数为3.6×10-10 mol/L,小鼠中和实验结果显示,4E12抗体可部分中和破伤风毒素.结论 筛选到一株高亲和力的鼠源单抗,为破伤风毒素检测及中和抗体研发奠定了基础.
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关 键 词: | 破伤风毒素 抗体 单克隆 腹水制备 亲和力常数 |
Preparation and identification of monoclonal antibodies against tetanus toxin |
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Authors: | CHEN Yang-yang LIU Dong-qi ZHANG Wei-cai XIONG Xiang-hua ZHANG Xiu-juan |
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Abstract: | |
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Keywords: | |
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