缺氧诱导因子-1α对结直肠癌细胞上皮间质转化及 侵袭迁移的影响

摘要： 目的 探讨缺氧是否能促进不同分化程度结直肠癌细胞上皮间质转化 （EMT）， 并分析缺氧对结直肠癌细 胞侵袭、 迁移的影响。方法 分别选取 HCT116（低度分化）和 HT-29（高度分化）结直肠腺癌细胞。观察 0、 10、 25、 50、 100 及 150 mg/L 氯化钴 （CoCl2） 诱导 2 种细胞 48 h 后的形态变化。分析 0、 10、 25、 50 及 100 mg/L CoCl2 处理 48 h 后缺氧诱导因子 （HIF） -1α蛋白表达变化， 筛选出 CoCl2诱导细胞缺氧的最适合浓度。MTT 实验检测不同时间点 （0 、 24 、 48 、 72 及 96 h） CoCl2诱导 2 种结直肠癌细胞的增殖情况， 筛选出 CoCl2诱导缺氧的最佳时间。最佳浓度和时间 条件下， 对 HCT116 和 HT-29 细胞分别进行缺氧 （缺氧组） 和常氧 （常氧组） 处理， Transwell 侵袭和划痕实验检测 2 组 2 种细胞的侵袭、 迁移情况； Western blot 实验和 RT-PCR 实验检测 2 组 HIF-1α、 E-cadherin 及 Vimentin 的蛋白及 mRNA 表达水平。结果 50 mg/L CoCl2作用 48 h 时 2 种细胞均出现明显的形态改变。2 组 HCT116、 HT-29 细胞的 HIF-1α蛋白表达水平随 CoCl2浓度增加均呈先增后减趋势， 50 mg/L 为最适宜浓度 （P < 0.05）。0~96 h 时 2 种细胞不 论有无缺氧， 细胞增殖能力均呈先增后减趋势 （P＜0.05）， 48 h 为最佳作用时间。HCT116 和 HT-29 细胞系中缺氧组 穿膜细胞数和细胞迁移率均明显高于常氧组 （P＜0.05）。HCT116、 HT-29 细胞系中缺氧组 HIF-1α、 Vimentin 的蛋白 和 mRNA 表达水平均高于常氧组， 而 E-cadherin 的蛋白和 mRNA 表达水平低于常氧组（均 P＜0.05）。结论 缺氧 能诱导不同分化程度结直肠癌细胞均发生 EMT， 并能增强 2 种结直肠癌细胞的侵袭、 迁移能力。