环介导等温扩增快速检测临床假丝酵母菌属方法建立与应用

目的建立一种环介导等温扩增(LAMP)反应,根据假丝酵母菌属D1~D2 26SrDNA保守区域设计通用引物,直接对临床标本进行假丝酵母菌属检测。方法根据假丝酵母属的特异D1~D2 26SrDNA基因序列比对后的相对保守区设计特异引物,分别提取5种假丝酵母菌、临床对照菌株以及临床标本DNA,然后以LAMP技术扩增,并对白色假丝酵母菌孢子悬液进行系列梯度稀释检测,确定最低检测限。结果 5种假丝酵母菌直接提取DNA经LAMP和PCR方法检测均为阳性;30份经培养证实假丝酵母菌属感染标本,经LAMP检测有27份标本阳性,阳性检出率为90.0%;另10份临床对照标本和11种非假丝酵母菌属来源DNA样本经LAMP方法检测后结果均为阴性,无非特异性反应发生;LAMP最低检测限达到103 CFU/ml。结论结果证明LAMP是一种简便、快速、特异和敏感的检测方法,可以检测临床和环境标本中的常见假丝酵母菌属。