液质联用法测定大鼠心力衰竭过程中全基因组DNA及总RNA的甲基化水平变化

本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)检测心力衰竭过程中全基因组DNA及总RNA的甲基化水平的方法,以观察心梗组织及外周血甲基化率的变化及同步性。动物福利和实验过程均遵循广州医科大学动物伦理委员会的规定。建立了心肌梗死(myocardial infarction, MI)大鼠模型,并分为梗死1、4及8周组,以模拟心功能不同级别,并将大鼠在同一周龄实施安乐死,以保持周龄一致。从梗死边缘区心肌组织及外周血淋巴细胞中提取DNA及RNA,应用酶解法将DNA及RNA分解成单个核苷,定量测定并计算全基因组DNA及总RNA的甲基化率。结果显示,大鼠心梗后梗死组织与外周血淋巴细胞的全基因组DNA及总RNA甲基化水平增加且结果呈现一致性。本研究获得了心衰的发生和发展过程中DNA及RNA甲基化率变化的初步数据,进一步表明了表观遗传改变可作为心衰早期诊断的生物标志物。