| 应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点 |
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| 引用本文： | 高楠,黄冰,葛坚,王智崇,陈系古,张可飞,彭展,李彦峰.应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点[J].中国组织工程研究与临床康复,2006,10(45):39-42. |
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| 作者姓名： | 高楠 黄冰 葛坚 王智崇 陈系古 张可飞 彭展 李彦峰 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学中山眼科中心国家眼科学重点实验室,广东省广州市,510060
2. 中山大学中山眼科中心国家眼科学重点实验室,广东省广州市,510060;广州医学院荔湾医院,广东省广州市,510060 |
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| 基金项目： | 教育部博士点基金项目(20030558074)，国家“十五”科技攻关计划项目(2004BA720A15)，国家高技术研究发展计划(“八六三”计划)(2003AA205005)，广东省科技计划项目(组织工程重大专项)(A302020101)，广东省科技计划项目(2003A3020401)~~ |
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| 摘 要： | 目的:探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞,为组织工程学的进一步研究奠定基础。方法:实验于2005-07/12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成。健康3个月龄恒河猴2只,分离与培养猴表皮细胞,获取第2～4代的细胞,消化后,将细胞重新放回原瓶中,培养箱中静置20min,获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞。①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞。②对20min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测,以未经吸附分选的细胞作为对照。③20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片,进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色。④20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1(K10对应角蛋白)的mRNA反转录聚合酶链反应的检测。结果:①分选后的细胞体积较小,核浆比例较大。②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主(α6briCD71dim为82.5±1.641),也含有少量的短暂扩增细胞(α6briCD71bri为4.9±2.125),有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到(α6dim)。③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性,K10阴性;分选后未黏附细胞K10为阳性,而K15和整合素β1均为阴性。④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素,K10没有表达;而分选后剩余的细胞只表达K10。结论:原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法。
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| 关 键 词： | 表皮 干细胞 细胞分离 |
| 文章编号： | 1671-5926(2006)45-0039-04 |
| 修稿时间： | 2006年4月20日 |
Methodological characteristics of former plate attachment to isolate epidermal stem cells |
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| Gao Nan,Huang Bing,Ge Jian,Wang Zhi-chong,Chen Xi-gu,Zhang Ke-fei,Peng Zhan,Li Yan-feng.Methodological characteristics of former plate attachment to isolate epidermal stem cells[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2006,10(45):39-42. |
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| Authors: | Gao Nan Huang Bing Ge Jian Wang Zhi-chong Chen Xi-gu Zhang Ke-fei Peng Zhan Li Yan-feng |
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