| 正交设计优化地枫皮ISSR-PCR反应体系 |
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| 引用本文： | 唐 辉,陈宗游,史艳财,柴胜丰,王满莲,孔德鑫.正交设计优化地枫皮ISSR-PCR反应体系[J].中草药,2013,44(5):610-615. |
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| 作者姓名： | 唐 辉 陈宗游 史艳财 柴胜丰 王满莲 孔德鑫 |
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| 作者单位： | 中国科学院广西植物研究所,广西桂林,541006 |
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| 基金项目： | 中国科学院"西部之光"人才培养计划项目(项目编号：(2009),24)广西科技创新能力与条件建设(项目编号：0992028-10)广西区专项基金(项目编号：(2008)80)广西科技攻关项目(项目编号：10124008-1)广西植物研究所基本业务费项目(项目编号：09030) |
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| 摘 要： | 目的 建立稳定性高、重现性好,适合地枫皮遗传差异分析的ISSR-PCR反应体系.方法 利用正交试验设计,对地枫皮ISSR-PCR反应的5个因素(Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA浓度)进行优化,PCR结果用SPSS统计软件分析,在此基础上对PCR反应过程中的退火温度和循环次数进行梯度检测.结果 大部分因素的不同水平对PCR反应有显著影响,其中Taq酶影响最大;地枫皮ISSR-PCR最佳反应体系(20 μL)为:Mg2+ 1.60 mmol/L、dNTP 0.22 mmol/L、引物0.90 μmol/L、Taq酶0.50 U、模板DNA 70.00 ng;最佳退火温度和循环次数分别为51.8℃和40次;从62条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论 建立的地枫皮ISSR-PCR反应体系,经过16份地枫皮样品检验,证明该体系稳定可靠,可用于地枫皮遗传差异分析.
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| 关 键 词： | 地枫皮 ISSR-PCR 正交设计 最佳退火温度 最佳循环次数 遗传差异 |
Optimization for ISSR-PCR reaction system of Illicium difengpi by orthogonal design |
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| TANG Hui,CHEN Zong-you,SHI Yan-cai,CHAI Sheng-feng,WANG Man-lian,KONG De-xin.Optimization for ISSR-PCR reaction system of Illicium difengpi by orthogonal design[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,2013,44(5):610-615. |
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| Authors: | TANG Hui CHEN Zong-you SHI Yan-cai CHAI Sheng-feng WANG Man-lian KONG De-xin |
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| Institution: | Guangxi Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, Guilin 541006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Illicium difengpi K I B et K I M ISSR-PCR orthogonal design optimized annealing temperature optimized cycle times genetic difference |
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