重组人促红细胞生成素治疗肾间质纤维化的作用机制研究

目的 探讨重组人促红细胞生成素（rHuEPO）治疗肾间质纤维化（RIF）的作用机制。方法 2014年7月-2015年6月，将人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）随机分为7组：空白对照组（E1组）：未加任何刺激物；rHuEPO对照组（E2组）：rHuEPO终浓度为20 U/ml；人纯化清蛋白诱导组（E3组）：人纯化清蛋白终浓度为5 mg/ml；E4组：加人纯化清蛋白（5 mg/ml）和rHuEPO（5 U/ml）；E5组：加人纯化清蛋白（5 mg/ml）和rHuEPO（10 U/ml）；E6组：加人纯化清蛋白（5 mg/ml）和rHuEPO（20 U/ml）；Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y27632组（E7组）：加ROCK抑制剂Y27632（10 μmol/L），30 min后加人纯化清蛋白（5 mg/ml）。采用细胞增殖试验检测刺激16、24、48、72 h时各组细胞增殖数，反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测RhoA、ROCK mRNA表达水平，细胞免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测纤维连接蛋白（FN）表达水平。结果 16 h时，各组细胞增殖数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。24、48、72 h时，各组细胞增殖数比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中E3~E6组高于E1组、E2组，E4~E6组高于E3组，E7组低于E3组，E5组、E6组高于E4组，E6组高于E5组（P＜0.05）。各组RhoA mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中E3~E6组高于E1组、E2组，E4~E6组低于E3组，E5组、E6组低于E4组，E6组低于E5组（P＜0.05）。各组ROCK mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中E3~E6组高于E1组、E2组，E4~E7组低于E3组，E5组、E6组低于E4组，E6组低于E5组（P＜0.05）。各组α-SMA表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中E3~E5组高于E1组、E2组，E4~E7组低于E3组，E5组、E6组低于E4组，E6组低于E5组（P＜0.05）。各组E-cadherin表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中E3~E6组低于E1组、E2组，E4~E7组高于E3组，E5组、E6组高于E4组，E6组高于E5组（P＜0.05）。各组FN表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中E3~E5组高于E1组、E2组，E4~E7组低于E3组，E5组、E6组低于E4组，E6组低于E5组（P＜0.05）。E3组、E4组、E5组、E6组RhoA mRNA与ROCK mRNA均呈正相关（P＜0.05）。结论 人纯化清蛋白能诱导HK-2细胞发生上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT），进而发生RIF，而rHuEPO通过阻断EMT的RhoA/ROCK信号转导通路从而抑制RIF发生，且在一定范围内rHuEPO水平越高，其抑制作用越强。

Mechanism of Recombinant Human Erythropoietin in the Treatment of Renal Interstitial Fibrosis