| 增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 曲萍,隋延仿,叶菁,张秀敏.增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化[J].陕西医学杂志,2006,35(10):1235-1237. |
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| 作者姓名： | 曲萍 隋延仿 叶菁 张秀敏 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础医学教学实验中心,西安,710033 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目（30271464）国家自然科学基金面上项目（30400167）全军医药卫生基金重点项目（01Z084） |
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| 摘 要： | 目的研究增强型绿色荧光蛋白(EnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)基因在大肠杆菌中的基因克隆、重组表达及纯化。方法采用PCR方法克隆EGFP全长cDNA序列,构建原核表达载体pGEX4T-1-EGFP,经过DNA序列测定证实其序列正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,用谷胱甘肽-Sepharose4B层析法纯化GST-EGFP融合蛋白。结果成功地克隆了EGFP全长cDNA序列,并进行原核表达以及蛋白的纯化,GST-EGFP的表达量占菌体蛋白量的40%以上。经纯化后纯度高于90%。菌体超声裂解后上清液及其纯化产物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光。结论本研究为应用EGFP追踪细胞吞噬功能等动态活动奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 基因复制 基因表达调控 @增强型绿色荧光蛋白 |
| 收稿时间： | 2006-04-29 |
| 修稿时间： | 2006-04-29 |
Gene clone, expression and purification of enhanced green fluorescent protein |
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| Qu Ping ,Sui Yanfang ,Ye Jing et al.Gene clone, expression and purification of enhanced green fluorescent protein[J].Shaanxi Medical Journal,2006,35(10):1235-1237. |
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| Authors: | Qu Ping Sui Yanfang Ye Jing |
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| Abstract: | Objective: To study the gene clone, expression and purification of EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) gene in E.coli. Methods: EGFP genes were cloned to build prokaryotic expression plasmid pGEX-EGFP. EGFP-GSTwere purified with GSTrap FF columns. Results: The EGFP-GST molecular weight is around 53 000D. The EGFP-GST solution after purification show bright kelly. Conclusion: In this study, the experimental foundation for the usage of EGFP in cell actions has been established. |
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| Keywords: | Gene duplication Gene exoression regulation @EGFP |
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