| 膜联蛋白Ⅱ基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 刘亚伟,戴兵,梅长林,付莉莉,蔡厚安,.膜联蛋白Ⅱ基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定[J].第二军医大学学报,2006,27(11):1181-1185. |
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| 作者姓名： | 刘亚伟 戴兵 梅长林 付莉莉 蔡厚安 |
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| 作者单位： | 第二军医大学长征医院肾内科,解放军肾脏病研究所,上海,200003;第二军医大学长征医院肾内科,解放军肾脏病研究所,上海,200003;第二军医大学长征医院肾内科,解放军肾脏病研究所,上海,200003;第二军医大学长征医院肾内科,解放军肾脏病研究所,上海,200003;第二军医大学长征医院肾内科,解放军肾脏病研究所,上海,200003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家自然科学基金，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建针对膜联蛋白(annexin)Ⅱ的短发夹RNA(shRNA)的表达载体,观察其对目的基因表达的影响.方法:根据GenBank中annexinⅡ基因已知序列设计了2条序列,即annexinⅡshRNA1、annexinⅡshRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照.据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接人pGenesil1载体,转化扩增后进行序列测定.3种重组表达载体均转染HEK293细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法分别在基因和蛋白水平上检测各自annexinⅡ的表达,以未转染细胞作为空白对照.结果:3种重组表达载体(pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-annexinⅡshRNA2和pGenesil1- negative shRNA)经限制性酶切及测序分析证明基因插入正确.转染HEK293细胞后,转染pGenesil1-annexinⅡshRNA2组细胞annexinⅡ基因和蛋白表达明显低于转染pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-negative shRNA以及空转染细胞(P＜0.05),而后三者间没有明显差异.结论:成功构建了针对annexinⅡ的shRNA表达载体(pGenesil1-annexinⅡshRNA2),转染细胞后可抑制annexinⅡ基因表达.
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| 关 键 词： | 膜联蛋白质类 RNA干扰 短发夹RNA |
| 文章编号： | 0258-879X（2006）11-1181-05 |
| 收稿时间： | 2006-06-01 |
| 修稿时间： | 2006-10-11 |
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