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人HL-60细胞GRα-LBD诱饵表达载体的构建和鉴定
引用本文:钟梁,郝坡,刘北忠,王东生,刘畅,金丹婷,王翀,王春光.人HL-60细胞GRα-LBD诱饵表达载体的构建和鉴定[J].重庆医科大学学报,2008,33(4):394-398.
作者姓名:钟梁  郝坡  刘北忠  王东生  刘畅  金丹婷  王翀  王春光
作者单位:重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016
基金项目:国家自然科学基金 , 国家中医药管理局科研项目 , 重庆医科大学校科研和教改项目
摘    要:目的:构建糖皮质激素(Glueocorticoid,GC)受体α配体结合域(GRα-LBD)的诱饵表达载体,为小分子配体酵母三杂交系统的建立奠定基础.方法:RT-PCR扩增HL-60细胞的GR α-LBD,克隆入诱饵载体pGBKT7中,测序正确后,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GR α-LBD转化到酵母AH109细胞中,提取酵母蛋白,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况.同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果:成功扩增了GRα-LBD,并成功亚克隆到pGBKT7中,测序结果正确.诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Westrrn blot分析也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白.结论:成功构建了GRα-LBD酵母诱饵表达载体,为建立小分子配体酵母三杂交系统奠定了基础.

关 键 词:HL-60  GRα-LBD  诱饵载体  诱饵蛋白
文章编号:0253-3626(2008)04-0394-05
修稿时间:2007年11月5日
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