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| 靶向Ang2的RNAi慢病毒载体的构建及其对恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因表达的影响 | |
| 引用本文： | 刘照亮,王彪,郭国祥,单秀英,王美水,庄福连,蔡传书,张明凤,张彦定.靶向Ang2的RNAi慢病毒载体的构建及其对恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因表达的影响[J].医学分子生物学杂志,2011,8(6). |
| 作者姓名： | 刘照亮 王彪 郭国祥 单秀英 王美水 庄福连 蔡传书 张明凤 张彦定 |
| 作者单位： | 1. 福建医科大学附属第一医院整形外科,福州市,350005 2. 福建医科大学附属第一医院放射治疗科,福州市,350005 3. 福建师范大学生命科学学院,福州市,350108 |
| 摘 要： | 目的 构建携带促血管生成素2-小干扰RNA(Ang2-siRNA)慢病毒载体,观察其对恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因表达的干扰作用.方法 将经XbaⅠ酶切电泳鉴定的带有加强绿色荧光蛋白的转移质粒(pNL-EGFP)载体与pSilencer 1.0-U6启动子-促血管生成素2-小干扰RNA(pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA)重组质粒连接,产生加强绿色荧光蛋白的转移质粒-U6启动子-促血管生成素2-Ⅰ(pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅰ)、加强绿色荧光蛋白的转移质粒-U6启动子-促血管生成素2-Ⅱ(pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅱ)慢病毒转移质粒,电泳筛选阳性克隆,测序鉴定.用连接成功的慢病毒转移质粒、水疱性口炎病毒G蛋白(pVSVG)包膜质粒和pHelper包装质粒共转染293T细胞,产生pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅰ、pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅱ慢病毒.收集病毒上清,测定病毒滴度.将收集的病毒上清感染恶性黑色素瘤细胞,通过实时荧光定量RT-PCR测定抑制Ang2基因表达的效率.结果 酶切电泳与测序鉴定证实成功构建了Ang2-SiRNA慢病毒载体,293T细胞测定病毒原液滴度为8.0×103/ml.实时荧光定量RT-PCR结果显示:Ang2-siRNA慢病毒载体感染恶性黑色素瘤细胞,抑制了恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因的表达(P＜0.05).结论 成功构建了Ang2-SiRNA慢病毒载体,体外研究显示Ang2-SiRNA慢病毒载体能抑制恶性黑色素瘤细胞中Ang2 mRNA的表达,为下一步进行裸鼠恶性黑色素瘤移植瘤生长的干预实验奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据. |
| 关 键 词： | RNA干扰 Ang2 慢病毒载体 恶性黑色素瘤 |
Construction of Recombinant Lentiviral Vector of siRNA for Ang2 and the Effect of the Expression of Ang2 Gene in Malignant Melanoma Cells |
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| LIU Zhaoliang,WANG Biao,GUO Guoxiang,SHAN Xiuying,WANG Meishui,ZHUANG Fulian,CAI Chuanshu,ZHANG Mingfeng,ZHANG Yanding.Construction of Recombinant Lentiviral Vector of siRNA for Ang2 and the Effect of the Expression of Ang2 Gene in Malignant Melanoma Cells[J].Journal of Medical Molecular Biology,2011,8(6). | |
| Authors: | LIU Zhaoliang WANG Biao GUO Guoxiang SHAN Xiuying WANG Meishui ZHUANG Fulian CAI Chuanshu ZHANG Mingfeng ZHANG Yanding |
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| Keywords: | |
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