沉默PLCε基因对人膀胱癌裸鼠移植瘤中Bcl-2及Bax蛋白表达水平的影响

目的:探讨应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默磷脂酶Cε (phospholipase C epsilon,PLCε)基因对人膀胱癌移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:人膀胱癌BIU-87细胞种植于裸鼠皮下,待移植瘤体积达40 mm3左右时,在肿瘤部位分别直接注射建构有PLCε特异性shRNA的重组表达质粒pGenesil-PLCε、阴性对照重组pGenesil-NP质粒以及0.9%氯化钠溶液;观察肿瘤体积的变化情况,30 d后处死全部裸鼠,取瘤组织,称瘤质量;瘤组织制备病理切片,HE染色观察细胞形态的变化;RT-PCR鉴定瘤组织中PLCε mRNA的表达;Western 印迹法检测瘤组织中PLCε、Bcl-2、Bax、p-Akt1/ Akt1和p-Bad/Bad蛋白的表达.结果:pGenesil-PLCε组小鼠移植瘤生长明显缓慢,瘤组织体积和质量均明显小于对照组;HE染色结果显示,瘤组织中出现细胞核固缩和裂碎等凋亡征象;RT-PCR检测结果显示, PLCε mRNA表达明显降低(P<0.05);Western 印迹法结果提示,PLCε和Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax蛋白表达增加,与2个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而Akt1、Bad蛋白的表达在实验组以及对照组中差异均无统计学意义,p-Akt1和p-Bad在移植瘤中未见表达.结论:沉默PLCε基因可明显抑制PLCε的表达,并下调Bcl-2蛋白以及上调Bax蛋白的表达,促进膀胱癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长.