| 人hepcidin真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 曾芳,卢银平,王凯平.人hepcidin真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立[J].华中科技大学学报(医学版),2010,39(4). |
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| 作者姓名： | 曾芳 卢银平 王凯平 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院药学院药剂学系,武汉,430030
2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒室,武汉,430022 |
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| 基金项目： | 湖北省自然科学基金重点资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建人hepcidin全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达hepcidin的HepG2细胞系,以应用于拮抗hepcidin从而增强铁吸收的活性药物筛选.方法 化学合成结合PCR拼接hepcidin 全长结构基因,插入原核表达载体pMD18-T中,测序正确后再经HindⅢ与EcoRⅠ双酶切,定向插入真核表达载体pcDNA3.0内,酶切鉴定后,采用脂质体转染法将重组质粒转染人HepG2细胞,G418选择抗性细胞克隆,ELISA检测转染细胞hepcidin的蛋白表达.结果 经酶切鉴定,成功构建hepcidin真核表达载体pcDNA3-hepcidin;重组质粒转染HepG2,经G418筛选3周获得抗性细胞克隆,其hepcidin蛋白表达量为普通HepG2细胞表达量的3倍.结论 成功构建了稳定高表达hepcidin的HepG2细胞,该稳定转染细胞系的建立为进一步研究hepcidin降低肠道铁吸收的分子机制以及筛选拮抗hepcidin作用的活性药物奠定了实验基础.
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| 关 键 词： | 人hepcidin 真核表达 全长结构基因 稳定转染 |
Construction of Human Hepcidin Eukaryotic Expression Vector and Establishment of Stably Transfected HepG2 Cell Line Expressing Human Hepcidin |
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| Zeng Fang,Lu Yinping,Wang Kaiping.Construction of Human Hepcidin Eukaryotic Expression Vector and Establishment of Stably Transfected HepG2 Cell Line Expressing Human Hepcidin[J].Journal of Huazhong University of Science and Technology(Health Sciences),2010,39(4). |
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| Authors: | Zeng Fang Lu Yinping Wang Kaiping |
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