体外延长胰岛培养时间的实验

目的：分离纯化火鼠胰岛，探索胰岛体外长期培养的新方法，为胰岛移植治疗糖尿病提供数量多、质量好的胰岛。方法：实验于2002—12／2004—03在哈尔滨医科人学组织工程与发育生物学研究章完成。①取16～22d龄，体质量80g的雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞：②采用改良的胰管内顺行灌注胶原酶消化体质量200-250g的Wistar大鼠胰腺，Ficoll不连续浓度梯度纯化，手挑法检出全部胰岛，用双硫腙鉴定胰岛。（3）分为胰岛单独培养组和胰岛与支持细胞联合培养组，应用倒置显微镜和荧光显微镜观察单独培养组和联合培养组的胰岛形态和存活率，在培养的第3，7，14，28灭用放射免疫法测定胰岛素分泌量，并通过胰岛素释放实验计算刺激指数。结果：①胰岛的回收率：回收率为53．6％，纯度为100％。②两组胰岛存活率的比较：联合培养组的胰岛存活率显著高于单独培养组培养14d：84％，3％；培养28d：82％，0（P〈0．01）l。（3）两组累积胰岛素分泌量及刺激指数比较：联合培养组胰岛素分泌量显著高于单独培养组培养7d：（105．0&;#177;11．6），（48．0&;#177;5．3）mIU／L（P〈0．01）1，刺激指数也显著高于单独培养组（培养7d：6．1&;#177;0．7，1．1&;#177;0．2）（P〈0．01）。结论：通过胆总管顺行注入胶原酶进行消化，Ficoll不连续密度梯度离心法进行胰岛纯化，体视镜下手挑胰岛，胰岛的回收率和纯度较高。睾丸支持细胞与胰岛联合培养可以促进胰岛生长，显著延长存活时间，是一种较好的体外长期培养胰岛的方法。

Elongation of islets culture time in vitro