| 基于脂代谢靶点蛋白hPPAR γ-LBD的抗肿瘤药物筛选模型的研究 |
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| 作者姓名： | 段雯 李伟 靳红卫 夏铸 程训官 张昕宇 郑小红 余瑜 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学药学院药物化学教研室,重庆,400016;重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,重庆,400016;重庆市药物工程研究中心,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:建立一种以脂代谢靶点蛋白hPPAR γ-LBD重组蛋白进行抗肿瘤药物筛选的方法.方法:采用pReceiver-B01-PPARγ-LBD表达质粒转至E.coli BL21(DE3)细胞,进行表达与纯化得到可溶性靶点蛋白hPPARγ-LBD重组蛋白,以罗格列酮为hPPARγ-LBD的阳性配体,以GW9662作拮抗剂,采用分子排阻色谱-高效液相色谱法(SEC-HPLC)测定hPPARγ-LBD重组蛋白与配体药物的结合活性.结果:在优化条件(16℃、0.6mmol/LIPTG、诱导20 h)下,能可溶性表达hPPARγ-LBD重组蛋白;经镍亲和色谱纯化后,以每升LB培养基计可获得41 mg、纯度为95%的hPPARγ-LBD重组蛋白;该重组蛋白与罗格列酮特异性结合率约65%,Kd值为625 nmol/L;与德氮吡格(Tetrazanbigen,TNBG)特异性结合率约60%,Kd值为1 000nmol/L.结论:本文基于脂代谢靶点蛋白hPPARγ-LBD建立了抗肿瘤药物体外筛选模型的方法,该方法快速、稳定、安全及简便,能应用于抗肿瘤药物的筛选.
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| 关 键 词： | 脂代谢 靶点蛋白 hPPARγ-LBD 抗肿瘤药物 药物筛选模型 罗格列酮 德氮吡格 |
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