细胞联合培养杯膜的孔径对血小板源性生长因子通透的影响

目的 探讨细胞联合培养杯膜的孔径对生物大分子通透的影响，解决血管细胞分子力学生物学实验的关键技术问题。方法 以杯底PET膜孔径为0.4 μm和1.0 μm的两种型号细胞联合培养杯作为研究对象，将大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）和内皮细胞（endothelial cells, ECs）分别种植于联合培养杯底PET膜的内外侧面。实验分为EC/VSMC联合培养施加低切应力组、PET膜未接种细胞静止组、PET膜单侧接种细胞静止组和PET膜双侧接种细胞静止组。ELISA检测低切应力组ECs侧和VSMCs侧培养液中血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor BB, PDGFBB）含量，Western blotting检测重组PDGF-BB（rPDGF-BB）刺激后，各组细胞内信号转导分子p-ERK1/2和p-Akt以及核骨架蛋白Lamin A的表达变化。结果 EC/VSMC联合培养施加0.5 Pa层流低切应力12 h后，0.4 μm联合培养杯VSMCs侧PDGFBB浓度显著高于ECs侧。0.4 μm和1.0 μm两种孔径的PET膜未接种细胞时，rPDGF-BB上调了隔开培养细胞的pERK1/2和p-Akt表达，并下调Lamin A表达。PET膜外侧面接种单层细胞时，rPDGF-BB上调了对侧细胞的p-ERK1/2和p-Akt表达，并下调Lamin A表达。PET膜内外侧面均接种细胞时，rPDGF-BB仅能影响0.4 μm PET膜同侧细胞的pERK1/2、p-Akt和Lamin A表达，对对侧细胞无明显作用；而1.0 μm PET膜两侧细胞的p-ERK1/2、p-Akt和Lamin A表达无显著性差异。结论 两种有孔PET材料本身均允许生物大分子的通透，而细胞接种会影响有孔PET膜对生物大分子的通透。0.4 μm孔径PET膜两侧均接种细胞时，对生物大分子的通透明显减弱，更接近于在体情况。

Effect from different pore sizes of co-culture inserts on the permeability of platelet derived growth factor