晚期糖基化终产物通过调控F-actin/YAP抑制小鼠胚胎成骨细胞成骨分化

目的 考察晚期糖基化终产物（AGE）对小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法 用不同质量浓度（100、200、300 mg/L）AGE作用于MC3T3-E1细胞，采用CCK-8法检测细胞增殖活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用碱性磷酸酶（ALP）染色检测细胞成骨能力，采用qPCR检测成骨相关基因（骨钙素、ALP和Runx2）及Yes相关蛋白（YAP）和β-联蛋白的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测YAP和β-联蛋白的蛋白质表达，采用免疫荧光法观察YAP和β-联蛋白的细胞核内含量及细胞骨架蛋白纤丝状肌动蛋白（F-actin）的表达。结果 MC3T3-E1细胞在200、300 mg/L AGE处理后增殖活性降低、凋亡率增加（P均＜0.05），100 mg/L AGE对细胞增殖和凋亡无明显影响，故选取100 mg/L AGE进行实验。在成骨诱导培养条件下，与对照组相比，MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后ALP染色较浅，骨钙素、ALP和Runx2的mRNA表达均较低（P均＜0.05）。在常规培养条件下，与对照组相比，MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后F-actin形态和分布发生明显改变；YAP的mRNA和蛋白质表达均无明显变化，但其细胞核内含量减少；β-联蛋白的mRNA和蛋白质表达均降低（P均＜0.05），但其细胞核内含量无明显变化。结论 AGE能抑制MC3T3-E1细胞的增殖活性，诱导细胞凋亡，降低成骨分化能力，F-actin、YAP和β-联蛋白参与其调控过程。

Advanced glycation end products inhibit osteogenic differentiation of mouse embryonic osteoblasts by regulating F-actin/YAP