HERG 基因调控 NF-κB 通道抑制骨肉瘤恶性表型的研究

目的：检测HERG（human ether-à-go-go-related gene）钾离子通道在骨肉瘤中的表达，并探索小干扰 RNA（siRNA）沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting 和免疫组织化学法检测骨肉瘤 MG-63细胞和组织中 HERG 的表达。实验分组为：HERG-siRNA 处理为实验组，control-siRNA 处理为对照组，未行任何处理为空白组。分别采用 CCK-8法、克隆形成、流式细胞仪和 Tunel 法检测 MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化。最后采用 Western blo-tting检测骨肉瘤细胞中核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达水平。结果HERG 在骨肉瘤细胞和组织中异常高表达。CCK-8法结果示，实验组（75．34±4．45）％]与对照组（100．60±5．31）％]和空白组（100．00±5．66）％]的细胞增殖水平相比，差异有统计学意义（t ＝3．64，P ＝0．007；t ＝3．43，P ＝0．009）。克隆形成结果示，实验组（134．30±11．82）与对照组（225．30±11．56）和空白组（232．80±12．21）的克隆形成数相比，差异有统计学意义（t ＝5．51，P ＝0．002；t ＝5．80，P ＝0．001）。流式细胞凋亡结果示，实验组（28．10±2．21）％]与对照组（9．36±2．42）％]和空白组（10．92±2．51）％]的早期凋亡所占比例相比，差异有统计学意义（t ＝5．72，P ＝0．005；t ＝5．14，P ＝0．007）。Tunel 法结果示，实验组（31．57±2．08）％]与对照组（10．35±1．82）％]和空白组（7．96±0．88）％]的凋亡指数相比，差异有统计学意义（t ＝7．69，P ＝0．002；t ＝10．48，P ＝0．001）。抑制 HERG 表达可明显下调 NF-κB 信号通路中细胞凋亡抑制蛋白-1（cIAP-1）、X 染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、Bcl-2和 Survivin 的活性，同时还下调磷酸化 NF-κB 抑制蛋白（IκB）α和 NF-κB p65的表达水平。结论HERG 在骨肉瘤中高表达，其通过调控 NF-κB 信号通路参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡过程，有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。