Toll样受体-5在喉鳞状细胞癌中的表达及作用

目的探索Toll样受体-5(TLR-5)对喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)增殖及肿瘤微环境的影响。方法采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肿瘤组织与癌旁组织中TLR-5的表达;采用免疫组织化学方法检测TLR-5的蛋白表达。利用GEPIA数据库统计TLR-5对患者总体生存率和无病生存率的影响。利用TCGA数据库分析与TLR-5相关的基因,并以相关系数绝对值>0.3为界,用Metascape分别以正相关和负相关基因行聚类分析。在Hep-2细胞系中用慢病毒构建TLR-5敲除和过表达的稳定细胞系,之后用鞭毛蛋白(flagellin)刺激24、48、72 h,通过检测CCK8的吸光度值(OD值)反映细胞的增殖情况。采用qRT-PCR和酶联免疫吸附测定法检测TLR-5对炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和IL-17的表达差异。利用TIMER数据库行TLR-5与免疫细胞浸润比例的相关性分析,并用TCIA数据库分析不同免疫细胞对患者生存预后的影响。结果TLR-5在喉鳞癌组织及癌旁组织中均有表达,且在癌旁组织中的表达明显高于癌组织。预后分析结果表明,高表达TLR-5的喉鳞癌患者较低表达者总体生存率更高。基因聚类分析结果显示,TLR-5正调控淋巴细胞激活、免疫应答、细胞因子分泌、细胞黏附等过程;负调控核糖核酸酶复合物生成、翻译终止、核糖体大亚单位合成、蛋白质折叠及细胞周期等。TLR-5敲除组的OD值在各时间点均明显高于过表达组;鞭毛蛋白刺激后,各组在各时间点的OD值较无刺激减小。TLR-5激活后上调IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17的表达。TLR-5的表达与B细胞、CD8^+T细胞、CD4^+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞的浸润比例呈正相关,且B细胞浸润比例与预后呈正相关。结论TLR-5激活抑制喉鳞癌细胞增殖并促进炎症因子表达;TLR-5激活可招募多种免疫细胞。

Expression and function of Toll-like receptor-5 in laryngeal squamous cell carcinoma