| 重组天花粉蛋白的原核表达纯化和免疫原性分析 |
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| 引用本文： | 王萍,丁世萍,李继承. 重组天花粉蛋白的原核表达纯化和免疫原性分析[J]. 解剖学报, 2006, 37(2): 172-176 |
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| 作者姓名： | 王萍 丁世萍 李继承 |
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| 作者单位： | 浙江大学细胞生物学研究所,杭州,310031;浙江大学细胞生物学研究所,杭州,310031;浙江大学细胞生物学研究所,杭州,310031 |
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| 基金项目： | 浙江省科技厅资助项目;浙江省教育厅资助项目;浙江省中医药管理局科研项目 |
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| 摘 要： | 目的构建携带天花粉蛋白基因的高效表达载体,对比原核表达的重组天花粉蛋白和天然蛋白的免疫原性.方法通过RT-PCR技术扩增无N端和C端序列的TCS基因,测序鉴定后克隆入表达载体pET-29b中,IPTG诱导表达.用金属螯合层析法纯化重组蛋白.薄层扫描及Bradford法检测纯化后重组蛋白的纯度和含量.间接ELISA法检测重组蛋白和天然蛋白产生的多克隆抗体效价.Western blotting检测重组蛋白与抗天然蛋白抗体之间的免疫反应性.结果 1.双酶切鉴定结果表明,pET-29b-TCS成功构建;2.30℃,1 mmol/L的IPTG诱导4 h,重组蛋白的表达量最高（占细菌总蛋白量的36%）,主要以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中;3.His-tag特异性结合树脂纯化后,获得了纯度达95%的重组蛋白,纯化后的蛋白含量为1.2 g/L;4.间接ELISA法检测天然蛋白和重组蛋白产生的抗体效价分别为1：4 960和1：5 120;5.Western blotting测纯化的重组蛋白与抗天然蛋白的多克隆抗体之间有特异反应性.结论本实验成功构建了高效表达载体pET-29b-TCS,携带的天花粉蛋白基因无N端和C端编码序列.重组蛋白的抗体效价显著低于天然蛋白,表明天然蛋白的糖基化与其免疫原性之间有一定的关系.
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| 关 键 词： | pET-29b-TCS重组表达载体 重组天花粉蛋白 天然天花粉蛋白 免疫原性 逆转录聚合酶连反应 |
| 收稿时间： | 2005-04-18 |
| 修稿时间： | 2005-04-182005-09-20 |
HIGH-LEVEL EXPRESSION OF RECOMBINANT TRICHOSANTHIN IN ESCHERICHIA COLI AND EVALUATION OF ITS IMMUNOGENICITY |
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| WANG Ping,DING Shi-ping,LI Ji-cheng. HIGH-LEVEL EXPRESSION OF RECOMBINANT TRICHOSANTHIN IN ESCHERICHIA COLI AND EVALUATION OF ITS IMMUNOGENICITY[J]. Acta Anatomica Sinica, 2006, 37(2): 172-176 |
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| Authors: | WANG Ping DING Shi-ping LI Ji-cheng |
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| Affiliation: | Institute of Cell Biology, Zhejiang University, Hangzhou 310031, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Recombinant expression vector pET-29b-TCS Recombinant trichosanthin Natural trichosanthin Immunological characterization RT-PCR |
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