超高效液相色谱-串联质谱法同时测定15种胆汁酸的方法分析

目的初步建立同时测定人体血清中15种胆汁酸的超高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的分析方法。方法通过同位素标记的胆汁酸作为内标,使用乙腈对血清中的胆汁酸进行提取,采用Waters BEH C18色谱柱,对15种胆汁酸进行分离。使用串联质谱进行检测,在负离子模式使用多反应监测模式定量分析血清中胆汁酸的浓度。结果 15种胆汁酸在1.0~6 000.0nmol/L范围内线性关系良好,线性相关系数r20.993;目标物的定量限为1.0~10.0nmol/L;低、中、高浓度的平均回收率为97.1%~108.3%,日内、日间平均相对标准偏差小于7.8%。所开发的方法被应用于检测24例健康志愿者的血清标本,健康者的胆汁酸以甘氨酸结合型为主,游离型胆汁酸和牛磺酸结合型胆汁酸浓度相对较低。男性血清中脱氧胆酸浓度显著高于女性,男性血清中甘氨熊脱氧胆酸浓度显著低于女性,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中15种胆汁酸的水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清15种胆汁酸检测的参考方法。