| 人MCPH1基因重组慢病毒的制备及稳定感染HeLa细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 麦 力,张 冀,刘革力,卜友泉,李 韵,樊建军,宋方洲.人MCPH1基因重组慢病毒的制备及稳定感染HeLa细胞系的建立[J].重庆医科大学学报,2014,38(3):290-294. |
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| 作者姓名： | 麦 力 张 冀 刘革力 卜友泉 李 韵 樊建军 宋方洲 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心、基础医学院生物化学与分子生物学教研室，重庆 400016 |
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| 摘 要： | 目的：构建人MCPH1（microcephalin 1）基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法：将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中，构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1，经酶切和测序鉴定后，与慢病毒包装质粒共转染293T细胞，包装重组慢病毒，滴度测定后，感染HeLa细胞，用有限稀释法筛选稳定的细胞克隆，real-time PCR和Western blot分别检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白水平。结果：经酶切和测序鉴定，成功构建MCPH1重组慢病毒载体，并成功包装慢病毒，滴度为1.24×109 TU/ml；慢病毒感染HeLa细胞后经有限稀释法成功筛选到MCPH1稳定表达细胞株pLenO-DCE-MCPH1-HeLa；real-time PCR证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株较正常组HeLa（P=0.000）和pLenO-DCE-HeLa组（P=0.000）的MCPH1 mRNA水平显著地增高；Western blot进一步证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株过表达MCPH1。结论：成功构建MCPH1重组慢病毒，并建立了稳定表达MCPH1基因的细胞株pLenO-DCE-MCPH1-HeLa，为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 慢病毒 MCPH1基因 宫颈肿瘤 单克隆细胞 |
Construction of a recombinant lentivirus expressing MCPH1 and establishment of its stably infected HeLa cell line |
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| Mai Li,Zhang Ji,Liu Geli,Bu Youquan,Li Yun,Fan Jianjun,Song Fangzhou.Construction of a recombinant lentivirus expressing MCPH1 and establishment of its stably infected HeLa cell line[J].Journal of Chongqing Medical University,2014,38(3):290-294. |
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| Authors: | Mai Li Zhang Ji Liu Geli Bu Youquan Li Yun Fan Jianjun Song Fangzhou |
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