转录因子Twist基因慢病毒质粒构建及其促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化

目的：构建转录因子Twist基因的慢病毒质粒，其高表达促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition，EMT）。方法：pcDNA3/myc-tagged-Twist质粒扩增并亚克隆至载体pLVX-puro中构建成pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒。将其转染人胚肾细胞HEK293T，收取病毒上清感染乳腺癌MCF-7细胞。免疫荧光法和蛋白质印迹法（Western blot）检测转录因子Twist 蛋白、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白（Vimentin）的表达。Transwell法检测细胞侵袭能力。结果：pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒酶切及测序结果完全正确；相对于对照细胞（MCF-7-Vector细胞），转染Twist基因的MCF-7细胞（MCF-7-Twist细胞）Twist蛋白、间质标志蛋白Vimentin表达水平明显升高，上皮标志蛋白E-cadherin表达水平明显降低（P<0.05），侵袭能力显著增强（P<0.05）。结论：pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒构建成功，转录因子Twist通过MCF-7细胞上皮间质转化促进了乳腺肿瘤侵袭能力增强。