推拿对脑瘫幼鼠海马炎症的拮抗作用及DNA甲基化调控机制

目的观察推拿对脑瘫(Cerebral palsy,CP)幼鼠海马炎症细胞因子TNF-α和IL-10蛋白表达的影响及其DNA甲基化水平,探讨推拿对脑瘫幼鼠海马炎症的拮抗作用及机制。方法 39只SD雄性幼鼠随机分为3组:实验组(n=13)、模型对照组(n=13)和空白对照组(n=13),实验组和模型对照组在出生后第3天(Postnatal 3 days,P3)制备脑瘫模型。在P5天,实验组开始进行推拿干预,1次/日,15 min/次,持续4周,空白对照组和模型对照组不予任何干预。P33天处死所有幼鼠进行取材,取幼鼠脑内海马组织并保存于-80℃,采用蛋白质印迹法检测海马中的TNF-α和IL-10蛋白变化并分别以Sequenam质谱检测法和焦磷酸测序法检测各组海马组织内TNF-α和IL-10 DNA甲基化水平并以先检测蛋白后检测甲基化。结果实验组IL-10蛋白表达水平低于空白对照组,两组间差异无统计学意义(P0.05)。实验组和空白对照组IL-10蛋白表达水平高于模型对照组,差异有统计学意义(P0.05)。实验组TNF-α蛋白表达水平高于空白对照组,差异无统计学意义(P0.05)。与模型对照组相比,实验组和空白对照组TNF-α蛋白表达水平较低,差异有统计学意义(P0.05)。2.三组间IL-10基因启动子区域甲基化水平差异无统计学意义(P0.05),TNF-α基因启动子区域三组间差异有统计学意义(P0.05)。结论推拿后脑瘫幼鼠海马炎症细胞因子TNF-α,表达下降IL-10表达升高,其机制可能是推拿调控了炎症细胞因子TNF-α和IL-10的基因启动子区域甲基化水平,同时IL-10蛋白表达的改变可能也与其他因素的调节有关。