采用胶原酶加肝素构建大鼠脑出血致多器官功能障碍综合征模型

目的:利用Ⅶ型胶原酶加肝素构建大鼠脑出血致多器官功能障碍综合征模型,为进一步探讨急性脑血管病致多器官功能障碍综合征的发病机制提供实验模型依据。方法:实验于2003-11/2004-02在山东省医学科学院完成。①选取清洁级5～8月龄健康雄性Wistar大鼠96只,随机数字表法分为4组:正常对照组6只、假手术组6只、Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组42只、Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组42只,后两组又分为4,8,12,24,36,48,72h7个时相点,6只/时相点。②除正常对照组外,其余组均采用立体定向术在大鼠尾状核注入Ⅶ型胶原酶加肝素建立脑出血致多器官功能障碍综合征模型。在立体定向仪的引导下,用微量注射器(针头直径约0.6mm)沿钻孔垂直进针6mm,Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组缓慢注入Ⅶ型胶原酶6.668nkat和3.5IU肝素钠混合液2μL;Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组注入VII型胶原酶13.336nkat和3.5IU肝素钠混合液2μL,留针10min后缓慢退出。假手术组注射等体积生理盐水。③观察术后各时相点大鼠症状及体征变化,检测外周血白细胞、肝肾功能及心肌酶学的改变,光镜下观察脑、肺、肝、肾和小肠组织病理变化,计算全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征的发生率。结果:实验选取清洁级健康雄性Wistar大鼠96只,全部进入结果分析。①各组大鼠术后脑大体形态观察结果:假手术组未见明显血肿;Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组、Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组在术后4h均形成血肿,24h后血肿基本不再增大。Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组形成的血肿大于Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组。②各组大鼠术后神经功能的变化:假手术组神经功能评分为0分;Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组神经功能评分明显高于Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组[(3.32±0.49),(1.64±0.18)分,P<0.01]。③各组大鼠术后呼吸、心率、体温、外周血白细胞、肝功、肾功、心肌酶学的变化:与正常对照组比较,假手术组上述各项指标均无明显差异(P>0.05);Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组、Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组均明显升高(P<0.01),且Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组各指标升高幅度显著高于Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组(P<0.05)。④各组大鼠术后主要脏器病理的改变:正常对照组和假手术组各器官组织结构基本正常。Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组肺、肝、小肠、肾等脏器各时相点的病理改变以非特异性炎症反应为主。Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组肺、肝、小肠、肾等脏器各时相点的炎性病理改变均较Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组更加明显、持久。⑤脑出血后全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征的发生率:Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组分别为75.4%和21.4%,Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组分别为100%和67.9%。结论:大鼠尾状核注入13.336nkatⅦ型胶原酶加肝素法可以成功构建脑出血致多器官功能障碍综合征模型。

Establishment of model of multiple organ dysfunction syndrome induced by cerebral hemorrhage in rats with collagenase and heparin