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TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究
引用本文:高正琴,邢进,冯育芳,岳秉飞,贺争鸣.TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究[J].药物分析杂志,2011(9).
作者姓名:高正琴  邢进  冯育芳  岳秉飞  贺争鸣
作者单位:中国食品药品检定研究院;
基金项目:中国食品药品检定研究院中青年研究发展基金(2010C5)资助
摘    要:目的:建立特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法:针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008~2010年期间在北京采集的680份小型猪、小鼠、大鼠样本中的支原体进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测。结果:建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.328,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100%。对680份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出77份支原体阳性样本,但分离培养未能检出支原体阳性样本。结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从动物样本中检出支...

关 键 词:微生物  支原体  小沟结合物(MGB)探针  实时荧光定量PCR  检测  

TaqMan MGB probe real-time fluorescence quantitative PCR for rapid detection of Mycoplasma
GAO Zheng-qin,XING Jin,FENG Yu-fang,YUE Bing-fei,HE Zheng-ming.TaqMan MGB probe real-time fluorescence quantitative PCR for rapid detection of Mycoplasma[J].Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis,2011(9).
Authors:GAO Zheng-qin  XING Jin  FENG Yu-fang  YUE Bing-fei  HE Zheng-ming
Institution:GAO Zheng-qin,XING Jin,FENG Yu-fang,YUE Bing-fei,HE Zheng-ming(National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 100050,China)
Abstract:Objective:To develop a TaqMan MGB probe-based,sensitive and specific real-time fluorescence quantitative PCR assay for rapid detection of Mycoplasma.Methods:Primers and probes specific to 16S rRNA gene of Mycoplasma were designed.A TaqMan MGB probe-based,real-time fluorescence quantitative PCR was established.The specificity,sensitivity and stability of the assay were assessed.Then,the established TaqMan MGB probe real-time fluorescence quantitative PCR assay was applied to detect Mycoplasma in 680 specimen...
Keywords:microorganism  Mycoplasma  minor groove binder(MGB) probe  real-time fluorescence quantitative PCR  detection  
本文献已被 CNKI 等数据库收录!
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