胎儿心脏来源细胞的分离培养及鉴定*★

目的：胎儿心脏正处于组织器官形成和发育时期，其中的细胞数量和增殖能力应该高于成体组织，但是目前关于培养人胎儿心脏来源细胞的方法以及基本生物学特征还鲜见报道。实验拟建立体外培养胎儿心脏来源细胞的方法，探讨心脏来源细胞基本的生物学特征和细胞种类。 方法：实验于2005-10/2007-05在南京大学医学院和国家生物医药技术重点实验室完成。①实验材料：水囊引产的12~18周胎儿10例由南京大学医学院附属鼓楼医院提供，实验经产妇及家属同意，并经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：取胎龄12~18周水囊引产的胎儿心脏，将消化后获得的细胞培养于添加内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、干细胞生长因子、心肌营养素及含10% FBS 的DMEM/F12培养基中。③实验评估：应用显微镜观察细胞的形态特征，采用RT-PCR检测培养前后心脏来源细胞干细胞标志基因等基因的表达，流式细胞仪检测培养前及培养19 d后细胞的表面标志。 结果：①心脏来源的细胞可以生长增殖。培养16 d后出现克隆，并有类似生长中心的区域形成，类似生长中心区域内的细胞较小，形态接近圆形，细胞核占细胞比例大，而周围的细胞形状多为梭形核多角形，细胞核所占的比例较小，并且显微镜下可见正在分裂的细胞。②RT-PCR检测显示，胎儿心脏组织分离获得的心肌细胞中表达c-Kit、KDR、 GATA-4、Nkx-2.5、MEF-2c，不表达c-Tnl。培养19 d后细胞中GATA-4、KDR、 MEF-2c表达量降低,不表达c-Kit，Nkx-2.5和c-Tnl。③流式细胞仪检测发现培养19 d后细胞群中CD29和CD44高表达，CD45、GATA-4和c-Tnt低表达。 结论：建立了一种体外培养胎儿心脏来源细胞的方法，并确定细胞群中有心脏来源的间充质干细胞和心肌祖细胞。

Isolation, culture and identification of the cells derived from fetal heart