内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响研究

目的探讨内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响。方法以 2016 年 10 月—2018 年 10 月 25 例接受椎间盘摘除术的颈椎间盘突出症患者为研究对象，分为吸烟组（14 例）和非吸烟组（11 例）。两组患者年龄、性别、突出节段、Pfirrmann 分级比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。将术中获取的髓核组织，行 TUNEL 染色和 Western blot 检测，观察细胞凋亡情况。然后，采用酶序贯消化法分离培养髓核细胞并传代，取第 3 代细胞行 ELISA 检测炎性因子 IL-1β 和 TNF-α 含量，免疫荧光染色观察细胞中 P65 核转移情况，Western blot 检测内质网应激相关蛋白 GRP78 和 CHOP 表达，透射电镜观察细胞内质网超微结构。最后，为验证内质网调控作用，采用特异性抑制剂 4-PBA 处理吸烟组髓核细胞后，Western blot 检测 GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α 及 P65 蛋白相对表达量，流式细胞术检测细胞凋亡率；并以吸烟组未作处理的髓核细胞作对照。 结果髓核组织观测显示，吸烟组细胞凋亡率及凋亡相关蛋白 Caspase-3 和 PARP 相对表达量均明显高于非吸烟组（P<0.05）。髓核细胞观测显示，吸烟组髓核细胞分泌 IL-1β、TNF-α 水平以及 GRP78、CHOP 蛋白相对表达量均明显高于非吸烟组（P<0.05）；免疫荧光染色示吸烟组细胞 P65 主要表达在细胞核，而非吸烟组在细胞质；透射电镜观察显示，与非吸烟组相比，吸烟组内质网处于应激损伤状态。吸烟组髓核细胞经 4-PBA 处理后，GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α 及 P65 蛋白相对表达量以及细胞凋亡率均较处理前明显降低（P<0.05）。 结论吸烟可通过内质网应激导致髓核细胞凋亡和炎性反应加剧，抑制内质网应激有望成为延缓吸烟导致椎间盘退变的新靶点。