| 小鼠钙网蛋白的克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 曹春雨,王艳林,任玉珊,韩钰. 小鼠钙网蛋白的克隆与原核表达[J]. 医学争鸣, 2008, 29(23): 2119-2122 |
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| 作者姓名： | 曹春雨 王艳林 任玉珊 韩钰 |
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| 作者单位： | [1]三峡大学分子生物学研究所,湖北宜昌443002 [2]三峡大学医学院,湖北宜昌443002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:克隆小鼠钙网蛋白(CRT)并在E.coli中原核表达和纯化.方法:采用RT-PCR法从昆明鼠肝总RNA中克隆小鼠钙CRT cDNA,构建CRT原核表达质粒(pET-15b/CRT)并转化E. coli的Rossetta(DE3)菌株.IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,然后透析复性.分别用SDS-PAGE和Westem blot法鉴定CRT的表达和纯化.结果:从昆明鼠肝总RNA中成功克隆获得小鼠CRTcDNA,该cDNA序列被成功克隆入pET-15b原核表达载体.DNA测序表明,重组质粒pET-15b/CRT构建正确.转化pET-15b/CRT的E.coli,Rossetta(DE3)能够诱导性表达重组小鼠CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化.结论:成功克隆昆明小鼠CRT cDNA并建立了小鼠CRT原核表达和纯化的实验方法,为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 钙网蛋白 原核表达 蛋白纯化 小鼠 |
Cloning and prokaryotic expression of mouse calreticulin |
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| CAO Chun-Yu,WANG Yan-Lin,REN Yu-Shan,HAN Yu. Cloning and prokaryotic expression of mouse calreticulin[J]. Negative, 2008, 29(23): 2119-2122 |
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| Authors: | CAO Chun-Yu WANG Yan-Lin REN Yu-Shan HAN Yu |
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