eGFP标记肿瘤细胞小鼠模型的建立与应用

目的〖HT5"SS〗： 以携带绿色荧光蛋白基因（eGFP）的重组逆转录病毒（RV）标记肿瘤细胞,建立小鼠体内长期、系统肿瘤细胞研究模型,并初步探讨其应用。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 制备高滴度eGFPRV,感染小鼠白血病P388细胞,有限稀释法获得eGFP＋的单细胞克隆;在体外和DBA/2小鼠体内,分别以流式细胞术、荧光倒置显微镜、冰冻切片和普通病理切片、半固体集落培养和PCR等方法,观察小鼠体内eGFP标记肿瘤细胞的效率、定位和时效。〖HT5W〗结果 〖HT5"SS〗： eGFP基因导入率达80.2%,经克隆筛选后eGFP＋率>99.2%。P388eGFP细胞体外传代3个月后eGFP＋率为95.2%,体内序贯接种(56.3±1.25)d后eGFP+率为(93.3±0.50)% (n=3)。eGFP基因导入未影响P388细胞的体内外生物学特性。多聚甲醛灌注固定法和液氮速冻法可有效保存组织中的荧光,灌注固定法制备的标本适用于多种病理和组化染色观察;外周血、肝、脾、脑等脏器中eGFP＋细胞的分布、增殖,可用流式细胞仪和荧光显微镜等动态、定量观察,并可通过外周血的荧光细胞变化动态观察肿瘤细胞对治疗的反应;无菌获得的eGFP＋细胞可用于体外培养或体内序贯移植;PCR等技术可提高微量肿瘤细胞检测的敏感性。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 成功建立的模型可在体内外以多种方法长期、动态、敏感地追踪观察荧光标记的肿瘤细胞,可广泛应用于肿瘤和细胞组织工程等领域。

Establishment and application of eGFP gene marked tumor cells model in murine