| E2F-1基因过表达影响胃癌MGC-803细胞对化疗药物敏感性的研究 |
| |
| 引用本文： | 钱倩,王长青,李雷,谢玉波,肖强.E2F-1基因过表达影响胃癌MGC-803细胞对化疗药物敏感性的研究[J].中国肿瘤临床,2009,36(16). |
| |
| 作者姓名： | 钱倩 王长青 李雷 谢玉波 肖强 |
| |
| 作者单位： | 1. 广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科,南宁市,530021
2. 广西医科大学第一附属医院麻醉科,南宁市,530021 |
| |
| 基金项目： | 本文课题受国家自然科学基金，广西医疗卫生重点科研项目基金资助 |
| |
| 摘 要： | 目的:构建E2F-1真核表达载体,建立稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,探讨E2F-1基因过表达对胃癌MGC-803细胞化疗敏感性的影响.方法:应用Trizoi法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene-Bank公布的E2F-1基因序列设计带有酶切位点的引物并行扩增获得E2F一1的ORF片段;然后经限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.实时定量PCR(real-timequantitative PCR)和蛋白印迹(Western blotting)技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况.四唑蓝(MTT)法检测MGC-803/E2F-1组(实验组)、MGC-803/EV组(阴性对照组)和MGC-803组(未转染组)细胞对化疗药物的敏感性.结果:重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因之ORF完全一致.证明目的基因已成功克隆入真核表达载体,获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增.RT-PCR和Westernblotting实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.MTT法检测发现,5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)对MGC-803/E2F-1组细胞的抑制率分别为71.45%、74.03%、76.72%,均明显高于MGC-803/EV组(45.58%、53.69%、54.58%)和MGC-803组(53.70%、54.67%、55.05%)(P<0.05).结论:成功构建了真核表达载体pCMV-E2F-1-HA2,并建立了稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株MGC-803/E2F-1.E2F-1过表达增强了胃癌细胞对化疗药物的敏感性.
|
| 关 键 词： | 转染 MGC-803胃癌细胞 药敏试验 |
The Effects of E2F-10verexpression on Chemosensitivity of Gastric Cancer Cell Line MGC-803 |
| |
| QIAN Qian,WANG Changqing,LI Lei,XIE Yubo,XIAO Qiang.The Effects of E2F-10verexpression on Chemosensitivity of Gastric Cancer Cell Line MGC-803[J].Chinese Journal of Clinical Oncology,2009,36(16). |
| |
| Authors: | QIAN Qian WANG Changqing LI Lei XIE Yubo XIAO Qiang |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | E2F-1 |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
