| 滇龙胆GrGPPS基因的克隆及其序列分析与原核表达 |
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| 引用本文： | 王彩云,李富生,李涛,李彩霞,张晓东,王元忠. 滇龙胆GrGPPS基因的克隆及其序列分析与原核表达[J]. 中草药, 2014, 45(14): 2060-2068 |
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| 作者姓名： | 王彩云 李富生 李涛 李彩霞 张晓东 王元忠 |
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| 作者单位： | 1. 云南农业大学农学与生物技术学院, 云南 昆明 650201;云南农业大学农学与生物技术学院, 云南 昆明 650201;玉溪师范学院资源与环境学院, 云南 玉溪 653100;玉溪师范学院资源与环境学院, 云南 玉溪 653100;玉溪师范学院资源与环境学院, 云南 玉溪 653100;云南省农业科学院药用植物研究所, 云南 昆明 650223 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（81260608）；云南省教育厅科学研究基金重点项目（2013Z075）；科技部“十二五”国家科技支撑计划项目（2011BAI13B02-04） |
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| 摘 要： | 目的 从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶基因GrGPPS，进行序列特征分析和原核表达。方法 根据三年生滇龙胆转录组GrGPPS基因序列，设计特异性引物，通过RT-PCR扩增得到GrGPPS cDNA序列，并进行TA克隆、测序及序列分析；构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrGPPS，转入Escherichia coli Rosetta（DE3）中，在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下进行表达。结果 GrGPPS cDNA全长1 107 bp，编码369个氨基酸；序列分析表明，GrGPPS基因是异戊烯基合成酶家族的成员；氨基酸序列系统发育分析表明，GrGPPS与金鱼草AmGPPS亲缘关系最近；构建pGEX-4T-1-GrGPPS重组质粒，获得稳定的pGEX-4T-1-GrGPPS原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论 克隆了GrGPPS基因，建立pGEX-4T-1-GrGPPS稳定的原核表达体系，为进一步纯化和鉴定GPPS蛋白并研究其结构和功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 序列分析 原核表达载体 重组质粒 龙胆苦苷 基因序列 氨基酸序列 克隆 蛋白 奠定基础 系统发育分析 |
| 收稿时间： | 2014-03-16 |
Cloning, sequence analysis, and prokaryotic expression of GrGPPS gene in Gentiana rigescens |
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| WANG Cai-yun,LI Fu-sheng,LI Tao,LI Cai-xi,ZHANG Xiao-dong and WANG Yuan-zhong. Cloning, sequence analysis, and prokaryotic expression of GrGPPS gene in Gentiana rigescens[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2014, 45(14): 2060-2068 |
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| Authors: | WANG Cai-yun LI Fu-sheng LI Tao LI Cai-xi ZHANG Xiao-dong WANG Yuan-zhong |
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| Affiliation: | 1. College of Agriculture and Biological Technology, Yunnan Agriculture University, Kunming 650201, China;College of Agriculture and Biological Technology, Yunnan Agriculture University, Kunming 650201, China;College of Resources and Environment, Yuxi Normal University, Yuxi 653100, China;College of Resources and Environment, Yuxi Normal University, Yuxi 653100, China;College of Resources and Environment, Yuxi Normal University, Yuxi 653100, China;Institute of Medicinal Plants, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Kunming 650223, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gentiana rigescens Franch. GrGPPS gene cloning sequence analysis prokaryotic expression |
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