| ANXA11表达稳定下调的肝癌Hca-P细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 王嘉盛,刘淑清,郭春梅,孙明忠.ANXA11表达稳定下调的肝癌Hca-P细胞株的建立[J].大连医科大学学报,2013,35(3):218-222. |
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| 作者姓名： | 王嘉盛 刘淑清 郭春梅 孙明忠 |
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| 作者单位： | 1. 大连医科大学 生物化学与分子生物学教研室，辽宁 大连 116044；2. 大连医科大学 生物技术系，辽宁 大连 116044 |
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| 基金项目： | 基金项目：国家自然科学基金(81171957, 81050010, 81272186) |
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| 摘 要： | 目的构建针对膜联蛋白A11(Annexin A11,ANXA11)的shRNA(small hairpin RNA),稳定转染小鼠低淋巴道转移力肝癌Hca-P细胞,筛选ANXA11稳定下调的单克隆细胞株,为后续研究奠定基础。方法合成2条ANXA11的shRNA序列(shRNA-1和-2),与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo连接,构建pGPU6/GFP/Neo-shR-NA-ANXA11表达载体并转染Hca-P细胞,通过G418筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,Western blot检测Hca-P细胞ANXA11蛋白表达,并与空载体转染及对照组比较。结果成功构建了pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ANXA11重组表达质粒,并获得pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ANXA11-Hca-P单克隆细胞株;shRNA-1重组质粒的抑制效果在mRNA和蛋白水平对ANXA11抑制率分别为80.2%和77.7%,P<0.01。结论通过RNA干扰和基因转染技术成功建立了ANXA11表达稳定下调的Hca-P细胞株,得到了其单克隆细胞株,为进一步研究ANXA11在恶性肿瘤淋巴道转移中的作用及机制打下了基础。
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| 关 键 词： | ANXA11 淋巴道转移 Hca-P RNA干扰 |
| 收稿时间： | 2013/1/24 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/3/22 0:00:00 |
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