| 恶性疟原虫环子孢子蛋白在无细胞表达系统的表达及纯化研究 |
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| 引用本文： | 杨英超,韩静,辛晓芳,王国治,叶嗣颖.恶性疟原虫环子孢子蛋白在无细胞表达系统的表达及纯化研究[J].药物分析杂志,2011(7). |
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| 作者姓名： | 杨英超 韩静 辛晓芳 王国治 叶嗣颖 |
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| 作者单位： | 中国食品药品检定研究院细菌一室;华中科技大学同济医学院病原生物系; |
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| 摘 要： | 目的:应用麦胚无细胞表达系统(Wheat Germ Cell-Free System),表达及纯化恶性疟原虫环子孢子蛋白(Circumsporozo-ite protein,CSP),以便用于免疫学评价。方法:根据从PlasmoDB检索获得的恶性疟原虫CSP基因序列,设计一对特异引物,以从ATCC获得的恶性疟原虫3D7基因组质粒(P.f.3D7 genomic DNA)为模板,经PCR反应扩增目的片段。PCR产物经NcoI与Sma I双酶切后,与经过同样酶切的pIVEX 1.3WG载体连接,随后转化大肠杆菌DH5а,经筛选获得pIVEX WG1.3-CSP重组质粒。将该重组质粒加入到麦胚表达试剂盒并按照说明书进行表达,表达产物经亲和层析柱纯化,最终获得CSP蛋白。结果:PCR反应成功扩增CSP基因序列,并成功构建pIVEX WG1.3-CSP重组质粒;经WB试验证明,麦胚无细胞表达系统可成功表达并纯化CSP蛋白。结论:麦胚无细胞表达系统可高效表达恶性疟原虫CSP,为CSP用于后续的诊断试剂和疫苗评价方面的研究打下了坚实的基础。
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| 关 键 词： | 恶性疟原虫 环子孢子蛋白 麦胚无细胞表达系统 |
Expression and purification study of Plasmodium falciparum circumsporozoite protein with cell-free expression system |
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| YANG Ying-chao,HAN Jing,XIN Xiao-fang,WANG Guo-zhi,YE Si-ying.Expression and purification study of Plasmodium falciparum circumsporozoite protein with cell-free expression system[J].Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis,2011(7). |
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| Authors: | YANG Ying-chao HAN Jing XIN Xiao-fang WANG Guo-zhi YE Si-ying |
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| Institution: | YANG Ying-chao1,HAN Jing2,XIN Xiao-fang1,WANG Guo-zhi1,YE Si-ying2(1.Division of Bacterial Vaccines,National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products,Beijing 100050,China,2.Department of Pathogen Biology,Tongji Medical School HuaZhong University of Science&Technology,Wuhan 430030,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Plasmodium falciparum circumsporozoite protein Wheat Germ Cell-Free System |
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