山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）基因并测序，将编码山羊白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a（＋）上，构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE分析显示，表达的山羊IL-2融合蛋白分子量约为18kD。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后，通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。用所获得的重组山羊IL-2纯化产物经3次肌内注射新西兰白兔，制备了兔抗山羊IL-2多克隆血清，并用Western blot进行了证明。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2融合蛋白，并制备了抗山羊IL-2多克隆抗血清，为下一阶段关于山羊IL-2重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。