| 小鼠谷胱甘肽S转移酶K1启动子荧光素酶报告基因的构建及功能鉴定 |
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| 引用本文： | 胡文秀,方启晨,董坤,宋倩倩,姜杉,杨文静,贾伟平.小鼠谷胱甘肽S转移酶K1启动子荧光素酶报告基因的构建及功能鉴定[J].内科理论与实践,2012,7(3):175-179. |
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| 作者姓名： | 胡文秀 方启晨 董坤 宋倩倩 姜杉 杨文静 贾伟平 |
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| 作者单位： | 苏州大学;上海市糖尿病研究所 上海市糖尿病重点实验室 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科; |
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| 基金项目： | 上海市科委基础研究重点项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建小鼠谷胱甘肽S转移酶K1(mGSTK1)启动子荧光素酶报告基因质粒,并分析其活性。方法:根据GeneBank中mGSTK1基因序列设计引物,应用PCR技术扩增mGSTK1启动子片段,插入pGL3-basic载体,获得mGSTK1启动子报告基因质粒pGL3-mGSTK1-2046。再以pGL3-mGSTK1-2046为模板,进一步构建了2个5’端部分缺失的报告基因质粒:pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK1-76。将构建的报告基因质粒瞬时转染不同的细胞株3T3-L1和人胚肾(HEK)293,48 h后检测荧光素酶的活性。结果:所构建的质粒经酶切、测序鉴定正确。pGL3-mGSTK1-2046在3T3-L1和HEK293中均有不同程度的转录活性。将pGL3-mGSTK1-2046、pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK1-76转染HEK293细胞,结果显示pGL3-mGSTK1-936转录活性最高,而pGL3-mGSTK1-76转录活性显著降低。结论:成功构建mGSTK1启动子荧光素酶报告基因质粒;翻译起始点上游的-971～-111 bp片段是mGSTK1启动子的重要区域。为深入了解mGSTK1启动子的调控机制以及今后对代谢性疾病的治疗提供一定的实验基础。
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| 关 键 词： | 小鼠谷胱甘肽S转移酶K1 启动子 荧光素酶 报告基因 |
Construction and functional identification of mouse glutathione S-transferase kappa promoter luciferase reporter plasmids |
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| HU Wen-xiu
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FANG Qi-chen
,
DONG Kun
,
SONG Qian-qian
,
JIANG Shan
,
YANG Wen-jing
,
JIA Wei-ping.Construction and functional identification of mouse glutathione S-transferase kappa promoter luciferase reporter plasmids[J].Joournal of Internal Medicine Concepts& Practice,2012,7(3):175-179. |
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| Authors: | HU Wen-xiu FANG Qi-chen DONG Kun SONG Qian-qian JIANG Shan YANG Wen-jing JIA Wei-ping |
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| Institution: | 1.Soochow University,Suzhou 215006,China;2.Shanghai Diabetes Institute,Shanghai Key Laboratory of Diabetes Mellitus,Department of Endocrinology and Metabolism,Shanghai Jiaotong University Affiliated Sixth People’s Hospital,Shanghai 200233,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mouse glutathione S-transferase kappa 1 Promoter Luciferase Reporter gene |
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