| In Situ PLA技术原位分析MTA1与NuRD复合体其他组分的相互作用 |
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| 引用本文： | 刘健,王海娟,刘群,李春晓,刘欢,黄骁舾,孟希亭,赵枚,林晨,黄常志,钱海利. In Situ PLA技术原位分析MTA1与NuRD复合体其他组分的相互作用[J]. 癌症进展, 2014, 0(4): 394-398 |
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| 作者姓名： | 刘健 王海娟 刘群 李春晓 刘欢 黄骁舾 孟希亭 赵枚 林晨 黄常志 钱海利 |
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| 作者单位： | 刘健 (首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心,北京,100020)； 王海娟 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； 刘群 (首都医科大学附属北京妇产医院妇科肿瘤,北京,100006)； 李春晓 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； 刘欢 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； 黄骁舾 (首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心,北京,100020)； 孟希亭 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； 赵枚 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； 林晨 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； 黄常志 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； 钱海利 (中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021)； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(项目编号：81372158；81101518) |
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| 摘 要： | 目的原位检测肿瘤转移相关蛋白MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用并分析MTA1/NuRD复合体在HCT116细胞中的分布情况。方法首先利用co-IP技术体外验证MTA1与NuRD复合体其他组分Mi2、HDAC2及MBD3在HCT116细胞裂解液中的相互作用。然后利用In Situ PLA技术,体内原位检测MTA1与三者的相互作用,并根据镜下阳性荧光信号数目,比较MTA1与Mi2、HDAC2及MBD3之间的作用强弱;根据相互作用位点的亚细胞分布情况,分析间期及M期MTA1/NuRD复合体的核质分布情况。结果首次从体内原位水平证实MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用;其作用强度HDAC2最高,Mi2次之,MBD3最弱;首次发现MTA1/NuRD复合体存在很明显的胞质分布（约占总量的1/4）;另外,我们还首次发现在M期MTA1/NuRD复合体不再位于核区,而是位于染色体外周。结论In Situ PLA技术是一项有效的原位检测蛋白相互作用的新技术;MTA1/NuRD复合体可能参与MTA1胞质中功能的发挥;并且其胞质分布可能参与M期进程调控。
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| 关 键 词： | MTA1 NuRD复合体 相互作用 In Situ PLA技术 |
In situ analysis of the interactions of MTA1 with NuRD complex components by In Situ PLA technology |
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| Affiliation: | LIU Jian,WANG Hai-juan,LIU Qun,LI Chun-xiao,LIU Huan,HUANG Xiao-xi,MENG Xi-ting,ZHAO Mei,LIN Chen,HUANG Chang-zhi,QIAN Hai-li(1Medical Research Center, Beijing Chaoyang Hospital, Capital Medical University, Beijing, 100020, China ;2State Key Laboratory of Molecular Ontology, Cancer Institute ＆Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Beijing 100021, China ; 3Beijing Obstetrics and Gynecology Hospital, Capital Medical University, Beijing 100006, China) |
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| Abstract: | Objective To detect the in situ interactions of tumor metastasis associated protein MTA1 with other NuRD complex components：-Mi2, HDAC2 and MBD3 and analyze the subcellular distribution of MTA1/NuRD in HCT116 cells. Method The interaction of MTA1 with Mi2, HDAC2 and MBD3 in HCT116 cell lysate was first validated by in vitro co-IP analysis and then further detected by in vivo visualization using the PLA technology. The strength of interactions were compared by number analysis of the positive signals; moreover, the subcellular distribution of MTA1/NuRD in interphase and mitosis was analyzed by localization analysis of the positive signals. Result We, for the first time, validated the interaction of MTA1 with NuRD components at in vivo level; For the interaction strength, MTA1-HDAC2 was the highest（363 positive signals / 50 cells）, followed by MTA1-Mi2（280 positive signals / 50 cells）, and the weakest was MTA1-MBD3（208 positive signals / 50 cells）; Also it was the first time that MTA1/NuRD was found with obvious cytoplasm distribution which accounted for about 1/4 of the total; In addition,we also first noticed that during mitosis, MTA1/NuRD was no longer located in the nuclear area, but at the periphery of the chromosome which was different from interphase. Conclusion The in situ PLA is an effective new technology to detect the in vivo interaction of two proteins. MTA1 may also possess cytoplasmic functions through NuRD complex; And MTA1/NuRD may play a role in controlling mitosis process in the cytoplasm. |
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| Keywords: | MTA1 NuRD complex interaction in situ PLA technology |
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