重组人sCR1在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定 |
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引用本文: | 王广兰,宫璀璀,王文丽,张长远,王炳南,关晓峰,王轩,李璇.重组人sCR1在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2007,23(11):1066-1068. |
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作者姓名: | 王广兰 宫璀璀 王文丽 张长远 王炳南 关晓峰 王轩 李璇 |
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作者单位: | 解放军第153中心医院济南军区检验中心,河南,郑州,450042 |
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摘 要: | 目的:酵母细胞SMD1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2 -NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48~72hsCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为Mr约31000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经Ni2 -NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。
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关 键 词: | 毕赤酵母细胞 酵母载体 可溶性补体受体1 蛋白表达 |
文章编号: | 1007-8738(2007)11-1066-03 |
修稿时间: | 2007-09-14 |
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