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大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β—内酰胺酶基因分型的初步研究
作者姓名:桂炳东 杨春江 胡龙华 贾坤茹
摘    要:[目的]超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是一种新的β-内酰胺酶(BIA),主要产生于大肠埃希菌和克雷伯菌属,能水解三代头孢菌素和单环酰酶类,并被BIA抑制剂所抑制,ESBLs的产生和播散给临床感染的治疗带来极大挑战,质粒介导的。ESBLs已发现110多种,根据亚型编码基因同源性不同分为TEM、SHV和非TEM非SHV三类,其中以TEM和SHV型最多见,多由经典TEM-1、TEM-2和SHV-1发生点突变而来,编码基因中数个位点,各地区流行的ESBLs亚型各不相同,我们对江西南昌地区2001.9—2002.5临床分离的34株表型为产。ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌分别用TEM、SHV和CTX—M型。ESBLs特定引物进行PCR扩增电泳分析。[方法]细菌质粒DNA提取与PCR扩增:采用碱裂解法提取质粒DNA行PCR扩增引物,按有关文献进行,设大肠埃希菌ATCC25922标准产酶大肠埃希菌(TEM-10、TEM-12、TEM-29和SHV-1、SHV-7、CTX—M—3)为对照,DNA电泳分析:按有关文献进行,采用1%琼脂糖凝胶电泳,电泳1~2h后,在紫外投射下观察。[结果]34株产ESBLs的菌株经质粒DNA提取,行电泳分析显示菌株均存在阳性条带,再用三种特定引物分别行质粒DNA耐药基因PCR扩增,结果TEM型引物内扩增阳性为26株,CTX—M型引物扩增阳性4株,而SHV型引物则无1例出现阳性,另4株使用三种引物行PCR扩增得未到阳性结果。文献报道,大肠埃希菌产ESBLs的亚型以TEM型为主,肺炎克雷伯菌则以。TEM、SHV型兼有,我们认为未发现SHV型可能与本次分离到的实验菌株以大肠埃希菌为主有关。有4株用三种引物扩增耐药基因未能获得阳性结果,可能还存在其他亚型的ESBLs耐药基因,也不捧除这4株是表型确证法检测中出现的假阳性株。[结论]本研究未能对扩增耐药基因作进一步基因测序研究,因此,不能确定耐药基因亚型的具体型号和深入分析。

关 键 词:ESBL 大肠埃希菌 亚型 耐药基因 阳性 肺炎克雷伯菌 引物 SHV型 质粒DNA PCR扩增
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