| 干扰AFP蛋白表达的shRNA表达载体的构建及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 张国英,刘明社,赵中夫,张芸,杨慧,武延隽.干扰AFP蛋白表达的shRNA表达载体的构建及活性鉴定[J].长治医学院学报,2007,21(5):324-327. |
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| 作者姓名： | 张国英 刘明社 赵中夫 张芸 杨慧 武延隽 |
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| 作者单位： | 1. 长治医学院肝病研究所,046000
2. 山西医科大学 |
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| 基金项目： | 山西省教育厅技术开发基金
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山西省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:利用含报告基因EGFP的pGenesil-1质粒构建干扰AFP蛋白表达的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达的载体,并进行活性鉴定.方法:设计表达短发夹RNA的互补DNA序列,经退火成双链,克隆至带有U6启动子的质粒载体pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析.构建正确的重组质粒经脂质体转染HepG2细胞,检测转染率和培养细胞上清的AFP含量变化,确定重组质粒的活性.结果:构建了靶向AFP蛋白的2个shRNA重组质粒载体pGenesil-1-siAFP1和pGenesil-1-siAFP2.酶切鉴定和测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功.重组质粒有效转染HepG2细胞并显著抑制AFP表达.结论:成功构建具有活性的、能够表达shRNA靶向干扰AFP蛋白的2个重组质粒载体.
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| 关 键 词： | AFP蛋白 RNAi shRNA 重组质粒载体 |
| 收稿时间： | 2007-08-01 |
| 修稿时间： | 2007年8月1日 |
Construction and Activity Detection of Recombinant Plasmid with AFP-Targeted shRNAs |
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| Zhang Guoying, Liu Mingshe, Zhao Zhongfu,et al..Construction and Activity Detection of Recombinant Plasmid with AFP-Targeted shRNAs[J].Journal of Changzhi Medical College,2007,21(5):324-327. |
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| Authors: | Zhang Guoying Liu Mingshe Zhao Zhongfu |
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| Institution: | Institute of Hepatology , Changzhi Medical College |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | AFP RNA interference Short hairpin RNA HepG2 cells |
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